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云南干细胞研究:牙髓干细胞提取方法

更新时间:2024-06-07 09:24:30  点击量:

随着牙髓干细胞研究的深入,其提取方法也日益受到关注。牙髓干细胞具有多向分化的潜能,可以用于治疗多种疾病,因此其提取方法对于干细胞研究领域具有重要意义。本文将介绍牙髓干细胞的提取方法,包括酶消化法、胶原酶消化法、酶消化联合胶原酶消化法以及组织块贴壁法等。

一、酶消化法

酶消化法是牙髓干细胞提取中常用的方法之一。该方法利用特定的酶(如胶原酶、胰酶等)分解细胞间质的蛋白质,使细胞分离。具体步骤如下:

1. 收集牙齿:从供体身上获取牙齿,立即放入含有青霉素和链霉素的DMEM培养基中,保存于4℃冰箱中。
2. 去除牙冠组织:将牙齿取出,用刀片轻轻分离牙冠和牙根组织,将牙冠组织去除。
3. 酶消化:将牙根组织放入含有胶原酶和胰酶的消化液中,在37℃恒温摇床中消化2-4小时。
4. 分离细胞:消化完成后,将细胞悬液通过离心分离,收集细胞。
5. 细胞培养:将细胞接种于培养瓶中,加入适量的培养基和细胞因子,进行培养。

二、胶原酶消化法

胶原酶消化法是利用胶原酶分解牙周结缔组织中的胶原纤维,从而分离牙周干细胞的方法。具体步骤如下:

1. 收集牙齿:从供体身上获取牙齿,立即放入含有青霉素和链霉素的DMEM培养基中,保存于4℃冰箱中。
2. 去除牙冠组织:将牙齿取出,用刀片轻轻分离牙冠和牙根组织,将牙冠组织去除。
3. 分离牙龈组织:将牙根表面的牙龈组织小心分离,尽量不损伤牙周膜组织。
4. 胶原酶消化:将牙龈组织放入含有胶原酶的消化液中,在37℃恒温摇床中消化2-4小时。
5. 分离细胞:消化完成后,将细胞悬液通过离心分离,收集细胞。
6. 细胞培养:将细胞接种于培养瓶中,加入适量的培养基和细胞因子,进行培养。

三、酶消化联合胶原酶消化法

酶消化联合胶原酶消化法是同时利用酶消化和胶原酶消化两种方法,从牙周膜组织中提取牙周干细胞的方法。具体步骤如下:

1. 收集牙齿:从供体身上获取牙齿,立即放入含有青霉素和链霉素的DMEM培养基中,保存于4℃冰箱中。
2. 去除牙冠组织:将牙齿取出,用刀片轻轻分离牙冠和牙根组织,将牙冠组织去除。
3. 分离牙龈和牙周膜组织:将牙根表面的牙龈组织小心分离,同时尽量保留牙周膜组织。
4. 酶消化:将牙龈和牙周膜组织放入含有胶原酶和胰酶的消化液中,在37℃恒温摇床中消化2-4小时。
5. 胶原酶消化:将消化后的组织转移到新的离心管中,加入新的胶原酶消化液,继续在37℃恒温摇床中消化2-4小时。
6. 分离细胞:消化完成后,将细胞悬液通过离心分离,收集细胞。
7. 细胞培养:将细胞接种于培养瓶中,加入适量的培养基和细胞因子,进行培养。


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